krioprezervacije postopki so tisti, ki omogočajo celice , ki se uskladišči za nedoločen čas z izjemno nizkih temperatur , da prekine dejavnosti presnove. Obstajata dve glavni vrsti postopkov : kriogenskega ohranjanja ravnotežja ( konvencionalna počasno zamrzovanje ) in brez ravnotežja ali ultra- hitro zamrzovanje ( vitrifikacija ) . Izraz vitrifikacija prihaja izLatinske " steklovino " ali steklastega . Oba postopka uporabljajo za zaščito pri zamrzovanju z lastnostmi sredstva proti zmrzovanju tipa , da se prepreči poškodbe celic v procesu zamrzovanja . Ko se celice zamrznjene ali steklom , jih lahko neomejeno shranjeni tako, da jih potopimo v tekoči dušik , zelo hladne tekočine s temperaturo -196 ° C ( -321 F) . Če želite obnoviti presnovno aktivnost v celici ob odmrzovanju , strupene za zaščito pri zamrzovanju je treba odstraniti iz celice in normalno vodne bilance postopoma obnovljena , kot jecelica vrnila na normalno temperaturo delovanje .
Cell - Posebni dejavniki
postopek se uporablja za krioshranjevanje celice ali tkiva, je odvisna od številnih dejavnikov, vključno z velikostjo celice ,količina celične tekočine ( citoplazmi ) inkompleksnost celic ( eno celico ali tkivo ) . Celice z veliko količino citoplazmo kot so jajca težje krioshranjevanje kot celice , ki imajo samo preostalo citoplazmo , kot spermijev . Kriogenskem ohranjanju tkivo jajčnikov je bolj zahtevna , saj so prisotne v tkivo jajčnikov , vsako z različnimi potrebami optimalnih zamrzovanje vsaj tri različne vrste celic različnih velikosti . Počasno zmrzovanje protokoli so bili uporabljeni z uspehom z različnimi vrstami celic . Vitrifikacija Trenutno je najbolj učinkovita pri enocelični zamrznitev in manj učinkoviti pri tkiva , vendar raziskave je v teku optimizirati zasteklitve tkiv .
Vloga za zaščito pri zamrzovanju
citoplazmo celica vsebuje vodo, ki se obrne na ledenih kristalov na zmrzišče . Kdaj led oblike notranjosti celice jecelična razrezane in umre . Zato moratekočina v celici , ki se odstrani , preden dosežejo temperature padejo , da se prepreči poškodbe celic . Različne vrste proti zmrzovanju ( zamrzovanju ) tekočine se lahko uporablja , da dehidriramo celico pred zamrzovanjem , vključno glicerol , propandiol , dimetil sulfoxde ( DMSO ), etanola in sladkorje , kot je saharoza in trehaloza . Optimalni stopnji hlajenja ( in tajanje ) je odvisna od vrste uporabljenega zamrzovanju in na karakteristiko celice ali tkiva, ( ali so bili ) zamrznjeni . Za zaščito pri zamrzovanju so strupene za presnovo celic, zato je treba izpostavljenost celic za zaščito pri zamrzovanju v toplejših temperatur presnovnih zmanjšati ali se jim izogniti . Po odmrznitvi ali segreva celice , je treba za zaščito pri zamrzovanju popolnoma odstraniti iz celice , preden se ponovno vzpostavi delovanje metabolizma .
Equilibrium Versus neravnotežnostni krioprezervacije postopku
Stopnja zamrznitve je odvisno od tega, ali jeprotokol zamrznitev ravnotežje ali na osnovi ne- equilbrium . Pri postopkih tipa ravnovesje , jeoptimalen zamrznitev dosežen, ko jerazmerje med hitrostjo, pri kateri secelica sušenja vode in hitrosti, pri kateri se voda zunaj celice , ki preide v fazo ledu . Te ravnotežja ali počasno zamrzovanje protokoli običajno ur za dokončanje inračunalnik se uporablja za izvajanje programabilni zamrzovalniku , da se zagotovi , da so stopnje zamrznitve točno tako, kot je potrebno. Tam je ponavadi"drži " korak v protokolu blizu začetka , da se omogoči ročno ustvarjanje začetnih ledenih kristalov ali " sejanje " v tekočini zunaj celic , ki se uporablja .
vitrifikacijipovsem drugačen pristop k zamrznitvi ki se ne zanaša na rampi in doseganje ravnotežja med dehidracijo in nastanek ledu kristala . Vitrifikacija je tako ultrahitri da ni dovolj časa za nastanek ledu incelična tekočina pretvorimo direktno v steklaste ali stekleno fazo , brez poškodb na celico . Zamrzovalniki programabilni mere niso potrebne , ker secelica neposredno pahnila v izjemno mrzli tekočim dušikom , dosegli takojšen steklasto stanje .
Slow - Freeze Postopek
prvi korak postopek počasno zamrzovanju je izpostaviti celice zamrzovanju postopno korakih način , da se počasi omogoči ekvilibracijo celice z zamrzovanju pa sprošča vodo . Ko so celice očiščeno večini celična voda , so celice v zamrzovanju tekočini damo v posodo neke vrste , kot so umetne slame , stekleni ampuli ali plastične obsega vial.The tekočine , ki obdaja Celice počasno zamrzovanje je običajno manj od žličko in je lahko le nekaj kapljic . Predhodno označene posoda je napolnjena , zapre in mu v programiranem zamrzovalniku , ki počasi nižje temperature posode v obdobju minut ali ur do zelo nizkih temperaturah . Po nekaj minutah hlajenja , starter ledenih kristalov mora nastati v posodi z " sejanje " vsebnik . Mešanje izvede s pomočjo orodja (na primer , se klešče ), ki so bili predhodno ohlajeno v tekočem dušiku na dotik posodo in povzroči nastanek ledu kristali . Ta starter kristal bo začela kontrolirano nastajanje ledu kristali na enem mestu , varno stran od celic. Ko sejanje je končana , lahkoostali hladilnih rampe nadaljuje . Koposoda doseže temperature med -30 in -85 ° C , lahkoposodo, ki vsebuje celice, ki se potopiti neposredno v tekočem dušiku za dokončanjeohladitvi na -196 C.
vitrifikacijski
avtorske pravice Zdravje in Bolezni © https://sl.265health.com Vse pravice pridržane