Nekatere celice držijo dna petrijevke ali ostane suspendirana v tekočini . Celice so lahko rastlinskega ali živalskega izvora . Celice , ki se uporabljajo v tkivnih kulturah lahko primarne celice , kar pomeni, da so bile pobrane neposredno iz organizma , ali celične linije , ki je bil vzdrževan v kulturi . Celične linije so pogosto rakave celice , in to je treba upoštevati pri načrtovanju ali tolmačenje poskusov.
Privoščite celice nežno
Prilepljene celice , vzete iz njihove petrijevki za prehod z strganjem ali proteaze , splošno tripsinu in EDTA . Strganje ubije veliko celice in jih je treba uporabljati le pri pripravi celični lizati ( tekočih pripravkov celičnih vsebin za analizo ) ali , če je treba nujno preprečiti tripsin /EDTA .
Trypsinizing odstrani ne samo beljakovine, ki držijo celice na krožnik vendar je večina drugih proteinov na membrano celice tudi. Celice žogo in traja nekaj časa , običajno čez noč , da se ponovno vzpostavi vez s krožnika . Dodajanje minimalno količino tripsina - približno 1 ml za 25cm2 bučko - premikanju bučko za pet sekund ali manj na plaščenoslojne in nato izlivanjem ali izsesavanje odvečno tripsina bo zmanjšala količina tripsina , ki je izpostavljenenoplastna . Naj celice počivati v inkubatorju med tripsiniranju .
Po celice slide off dno posode , dodajte medij s serumom in sesanje lizata, gor in dol po pipeto nežno. Pustimo, da malo medijev , da ostanejo v posodi , kot ste pipete gor in dol večkrat razpad kepe in dobili celo prekinitev .
Ne sesati mehurčkov v pipeto . Prav tako ne močno mešajte Vortex celične suspenzije ; celice so zelo šibke v tem obdajajoče -up stanju .
za ogrevanje deaktivirajo ali ne segrevajte deaktivirajo
Ko so tehnike celične kulture v povojih , fetalni goveji serum ( FBS ) je znano, da vsebuje komplementa proteine , ki so v delovanju imunskega sistema proteini , ki razkrajajo celic. Dopolnjujejo proteini niso zaželene v celični kulturi . Toplotno inaktivaciji FBS pri 56 stopinjah Celzija 30 minut bo postala komplementa beljakovine neaktivne . Prewarming FBS do 37 stopinj C , je tudi dovolj , da inaktiviramo komplementa beljakovine .
V prvih dneh , toplota inaktivaciji FBS ubit tudi Mycoplasma in drugih onesnaževalcev . Takrat je sterilizacija filter izvedemo z 0.45um filtri . Danes filter sterilizirajte FBS in medijev skozi 0.1um ali celo 0.04um filtrov. Ne Mycoplasma bo porinil , da
To nam pušča vprašanje, ali toploto deaktivirajo
Heat inaktivaciji razgrajuje vse sestavne dele FBS - . . Kot so vitamini , aminokisline in rastnih faktorjev - . morda pod pragom za nekatere finicky celičnih linij
Če delate s celično linijo počasi raste ali finicky , razmislite samo filter za sterilizacijo svoje FBS . Morda boste našli kar povečuje trdnost svoje celice .
avtorske pravice Zdravje in Bolezni © https://sl.265health.com Vse pravice pridržane