Razmnoževanje rekombinantnih plazmidov,

Najdeno v nekaterih bakterij in kvasovk vrste , plazmidi so razmeroma majhne, ​​samo- posnema obroči DNK , ki se nahajajo izven glavne kromosoma celici je . So zelo koristne v genskega inženiringa , ker je relativno enostaven spoja izbrane gene iz drugih vrst v plazmidov , jih prenese med gostiteljskimi celicami iz enakih ali različnih vrst in spodbujanje jih posnemati - ali širi - na precej višji od - normalni - ali ojačena - mere . Rekombinantne plazmide so le tisti, ki so bili zasnovani , da vsebujejo gene iz drugih vrst . Še posebej zaostrila razmnoževanje , lahko rekombinantnih plazmidov hitreje in brez težav izražajo želene beljakovine na velikem industrijskem merilu . Tisto, kar potrebujete
že obstoječe plazmida in genskih knjižnic , ali plazmidi in genov , ki ste jih sami izolirani od svojih gostiteljskih organizmov in spojeni Rabljena oprema celični kulturi
Amplification zastopnik (-i ), kot so kalcijev klorid , električnega udara , vročino in mraz , kloramfenikol , električni udar in /ali Taq polimerazo encim
Proste Prikaži več navodil

1

Izberite postopka ojačevanja ali postopke , ki najbolje ustreza vašim specifičnim rekombinantnega plazmida in gostitelj organizem . Nekateri postopki bolje delujejo z nekaterimi plazmidov in gostitelji kot z drugimi. Če delate z romanom, še vedno eksperimentalne rekombinantnega plazmida in /ali so preizkusili različne gostiteljske vrste , boste morda morali določiti najboljši postopek ali postopke, ojačitve pomočjo poskusov in napak .
2

poskusite proces, imenovan preoblikovanje , če bi vaše posebne plazmidov in celic gostitelja vrste odgovor nanj . Chill celice in plazmidov na nič stopinj C v kalcijevega klorida ( CaCl ) rešitev. Hitro dvig temperature na 37-43 ° C. Ta nenadna sprememba temperature povzroča, celične membrane , da sprejmejo večje količine plazmida .
3

Pošlji visokonapetostnih impulzov električne energije skozi raztopino plazmidov in celic , če elektroporacijaželeni način ojačanja . Ta tehnika poveča prepustnost celične membrane za plazmidov .
4

izpostavljanje kulture gostiteljske celice nizkih ravneh kloramfenikol antibiotičnem ustvari toliko kot sto plazmidov na celico . Ta metoda zavira replikacijo glavni kromosomov gostiteljskih celic , hkrati pa induciranje nenadzorovano replikacijo plazmida , vključno gena spojimo v njej .
5

Uporabi polimerazne verižne reakcije ali PCR metoda za pridobivanje plazmidne kopij na zelo visokih redov velikosti . PCR temelji na polimerizacijo DNA , kemijske reakcije , skozi katero genskega zaporedja, ki se tvori v naravi . PCR je najbolj pogosto katalizirajo s toplotno obstojnega encima za Taq polimerazo , izpisanih iz bakterijskih vrst , ki živi v toplih vrelcih .