MBP protokolih čiščenja

MBP ali njegov vezavni protein maltoza najdemo v bakterije Escherichia coli , ki je del črevesne flore ljudi in živali . Čiščenje MBP vključuje vrsto postopkov, katerih cilj je ločevanje sestavin proteinski . V molekularni biologiji , čiščenje MBP jebistvenega pomena postopek za preučevanje strukture in funkcije te beljakovine. Prečiščevanje protokoli MBP vključujejo MBP čiščenje zlitih beljakovin , malega MBP- fuzijo in maltoza vezni protein fusion čiščenje oznako . MBP zlitih beljakovin Očistimo

Med tem postopkom , tehniki opere 20 ml polimer amiloze smole s Atris raztopine pri pH 7,4 , natrijev klorid, merkaptoetanola (ME) in etilendiamintetraocetne kisline ( EDTA) , po protokolih Online . Dodajo celične vzorce , centrifugira in analizirani na gelsko elektroforezo . Vzorce so analizirali tudi v chromatographer , kjer tehniki eluat ali opazovali sestavine rešitev , medtem ko poteka skozi kromatografsko kolono .
Small Lestvica MBP- fusion protein Čiščenje

Po Hebrew University of Jerusalem , biologi uporabo reagenta izopropil bD- 1 - tiogalaktopiranozidom ( IPTG ) , spin celične kulture za 10 min pri 8000 obratov na minuto pri 39,2 stopinj Celzija . Kasneje so odstranili supernatant in premešamo hladnega PBS pufra v vzorcu , ki je razdeljena na več cevi in ponovno centrifugiranje . Vzorci se nato hranijo na -112 stopinj Fahrenheit za analizo naknadno .
Maltoza Vezava Protein Fusion Tag Čiščenje

Zakoni oznake so z genskim inženiringom molekule , ki delajo v molekularni biologiji za odkrivanje in očisti proteine ​​. Ta protokol jezapleten niz postopkov, razdeljen v tri faze , ki vključuje gradnjo polyhistidine beljakovin čuvaja ( HisMBP ); pilotni poskus za oceno topnosti proteina ; in čiščenjevelikih MBP molekul , po naravnem protokolov . Poleg E.coli vzorcev , strokovnjaki uporabo ampicilin , kanamicin , IPTG , anhydrotetracycline , glukoza monohidrat, celična liza buffer , polimeraza DNA , PCR primerji , Tris - acetat - EDTA in etidijev bromid .