Kaj je gelsko elektroforezo

? Gelska elektroforeza jemetoda ločevanja , identifikacija in opis lastnosti zmesi proteinov in nukleinskih kislin . Denaturirani vzorci selijo po uporabi električne energije v tanko, mokrega gela ponavadi narejeni iz poliakrilamidnim ali agaroze . Ločene vzorci se obarvajo , tako da jih je mogoče videti . Gel elektroforeza se uporablja v beljakovinami in raziskave nukleinskih kislin in v bolnišnicah ugotoviti nenavadne beljakovine ali vzorce DNK za diagnosticiranje bolezni, genetske napake in genskih odnose. Priprava vzorca

Ko jedetergent , kot je natrijev dodecylsulfonate (SDS) dodamo beljakovine ali nukleinske kisline , se bodetergent povezujejo z in odprite ( denaturirani ) beljakovin in nukleinske kisline . Denaturacija proteinov omogoča lažje določiti njihovo molekulsko maso v elektroforezo . Znesek zahtevanega vzorca je običajno 100 do 500 nanogramov na vzorec pasu za proteine ​​in 5 do 100 ng na pasu za nukleinskih kislin v skupnem volumnu približno 25 let do 40 ul .
Geli

gel, navadno izdelan iz poliakrilamidnim ali agaroze , se lahko pripravi ali kupili ločiti te beljakovine . Gel jeveliko, kot želatino . To je predvsem voda , vendar je dovolj trden za ravnanje . Geli vsebuje pufer za nadzor pH . Gel je zelo tanka (1 do 2 mm ) in pravokotni . Ena stran izgleda kot glavnik z veliko manjkajočih zob . Vrzeli se imenujejo vodnjaki .
Vzorec Nalaganje

krajigel v komori s pufrom in nespremenjene beljakovine, se dodajo vodnjakov . Vzorci znanih molekulskih mas se dodajo zunaj vdolbinice . Geli so narejeni z različnimi količinami poliakrilamidnim . Zmanjšana močgel ( 4 odstotke ) je bolje za ločevanje molekul z visoko molekulsko maso , pri čemer jevišja trdnostjo gela ( 12 odstotkov ) za višje molekul molekulsko maso . Gradient gel spreminja jakost gela in ne more ločiti širok spekter beljakovin z izgubo neke resolucije .
Elektromigraciji

Z uporabo visoko napetostjo , denaturiranih proteinov pomikali proti dnu dobro. Večjamasa proteina ,počasneje se premika . Ko jeelektrika izklopljena, beljakovine nehajo premikati . Ena odstrani gel iz komore in kamenje v posodo z barvilom . Organske barve kot Coomaise modro ali kovinskih barvil, ki se uporabljajo za madeže proteinov , medtem ko so fluorescenčne barve , kot etidijev bromid uporablja za nukleinskih kislin .
Analiza rezultatov

S odvečnega madež , lahko vidimo, da mešanice loči v pasovih, ki so videti kot lestev . Položaj pasov je v primerjavi z razdaljo, ki jo standardi preselil za določanje molekulske mase vzorca v vsako skupino. Gel lahko dehidrirani z alkoholom in posušimo , tako da se lahko shrani . Intenzivnost barve pasu je nato mogoče meriti za določanje koncentracije beljakovin v vsakem pasu .
Protokol razvoj

Standardni protokoli so na voljo za delo z dobro znane beljakovin. Če jeraziskovalec zaposlen pri neznanem vzorcu , se lahkomoč gel , tip buffer , buffer pH , napetost , čas , in madež vse je treba optimizirati, da doseže najboljši ločevanje in signal.
protokoli