HPLC Tehnika

HPLC sinonim za visoko tekočinsko kromatografijo , standardni kvalitativno in kvantitativno analitičnim postopkom , ki se uporablja v analitskih laboratorijih . HPLC je zanesljiv in ponovljiv , zaradi česar jenajprimernejša tehnika za ločevanje , ki opredeljuje in kvantificira molekule iz kompleksne zmesi obeh kemijskih in bioloških sestavin. Štiri komponente

tehniko HPLC vsebuje štiri glavne sestavine . Prvič ,sistemom za dovajanje topila (mobilna faza ) , ki nosi vzorce skozi kolono , je pomembna, sajvpliva na polarnost sposobnost sistema za ločevanje molekul. Kromatografija je običajnonavpična steklena kolona , ki je napolnjena z adsorbcijsko . Drugič ,adsorbcijsko ( znan tudi kot stacionarno fazo , saj ne premakne ) je običajno silikagel ali aluminijev oksid . Tretjič, sistemuvedba vzorec je sestavljen iz nekakšnega injektor za uvedbo vzorca za analizo v sistemom za dovajanje topila . Četrti del jedetektor .
Detectors

tip detektorja odvisen od vrste vzorca tehniki se teče in kaj molekule so poskušali izolirati . Merilatehnik uporablja pri izbiri detektor vključujejo selektivnost , razmerje med signalom in šumom , mejo detekcije , linearno območje , čas konstantno , drift in obseg celic. Pogosto uporabljeni detektorji vključujejo ultravijolične - vidne detektorji Masni spektrometri, refrakcijski indekse , detektorji fluorescence ali svetlo izhlapevanja sipanje naprav .
Postopek

Vklopite detektor , črpalke ( ki se uporabljajo za dodajanje pritisk , da se premaknete mobilne faze skozi stacionarno fazo ) inračunalnik, ki bo snemanje in tiskanje kromatogram . Izberite ustrezne programe, da bi zbrali želenih podatkov . Vzorec vbrizgamo v pristanišču vbrizga . Bodite pozorni na tlak. Vsaka vrsta kolone ima največji pritisk ; ne presegajo tega , ali ločitev ne bo prišlo . Natisnite Kromatogram in analizirali rezultate . Na koncu vsake ponovitve , je pomembno, da splaknete injektor je , da se prepreči kopičenje , ki lahko ustvarijo blokade .
Vrste

hidrofilne interakcije kromatografije uporabljavezan polar stacionarno fazo innepolarno , se meša z vodo mobilna faza za ločevanje molekul na osnovi polarnosti . Ta tehnika ima sposobnost za ločevanje kislimi, bazičnimi in nevtralne vzorcev v posamezni fazi chromatogram.Normal kromatografijo uporablja polarno stacionarno fazo in nepolarno nevodnem mobilno fazo za ločevanje strukturnih izomerov ( molekul z enako molekulsko formulo , ki so atomi vezana skupaj različne načine ) . kromatografijo z reverzno fazo jenajbolj razširjen tip HPLC . Uporablja nepolarno stacionarno fazo in vodno nekoliko polarno mobilno fazo. Ta metoda je farmacevtska podjetja pogosto uporabljajo za razvrstitev drog pred release.Size kromatografije z izključitvijo ločuje molekule glede na njihovo velikost in lahko tudi določi strukturo proteins.Ion izmenjevalne kromatografije temelji na privlačnosti med ionov v topljenca in nabitih mest vezana na stacionarno fazo.
Uporabe

HPLC je uporaben v različnih aplikacijah . Lahko se uporablja za analizo farmacevtskih materialov, ki je koristno pri raziskovanju novih zdravil kot tudi čiščenje obstoječih. Uporablja se tudi za analizo bioloških tekočinah , pesticidi, eksplozivov in drugih materialov. Čeprav jepriljubljena tehnika za biomedicinske , biokemične in farmacevtske raziskave , se uporabljajo tudi v kozmetiki , hrani , okoljske in energetske industrije.