Zakaj ste morali po vsakem koraku sprati vodnjake?

Pranje vdolbinic mikroplošče po vsakem koraku v različnih biokemijskih in molekularno bioloških testih, kot so ELISA (encimski imunski test), izolacija DNA/RNA, PCR in Western Blotting, je bistveni del eksperimentalnega protokola. Namen korakov pranja je odstraniti ostanke reagentov, reakcijskih komponent ali kakršnih koli kontaminantov, ki bi lahko motili nadaljnje korake ali vplivali na točnost in specifičnost testa.

Tukaj je nekaj razlogov, zakaj so koraki pranja potrebni:

Odstranjevanje nevezanih snovi: Koraki pranja po dodajanju reagentov ali protiteles pomagajo odstraniti vse nevezane snovi, kot so odvečna protitelesa, nespecifične vezavne molekule ali reakcijske komponente, ki niso zajete ali vezane na trdno fazo. To zagotavlja, da je zaznavni signal specifičen in brez motenj iz ozadja.

Zmanjšanje navzkrižne kontaminacije: Koraki pranja učinkovito zmanjšajo tveganje navzkrižne kontaminacije med vzorci. To je še posebej pomembno pri hkratni obdelavi več vzorcev, saj preprečuje prenos reakcijskih komponent ali onesnaževal iz ene vrtine v drugo. Pranje pomaga ohranjati celovitost in točnost rezultatov posameznih vzorcev.

Učinkovito odstranjevanje motečih snovi: Pranje je potrebno za odstranitev snovi, ki bi lahko motile nadaljnje korake. Na primer, pri testu ELISA pranje pomaga odstraniti nevezane komplekse konjugat-protitelo, s čimer se zmanjša razvoj barve ozadja in poveča specifičnost kolorimetrične reakcije. Pri PCR izpiranje odstrani nukleotide, primerje in polimeraze iz prejšnjih ciklov pomnoževanja, kar zmanjša tveganje prenosa kontaminacije in zagotovi natančno pomnoževanje v naslednjem ciklu.

Standardizacija in ponovljivost: Z upoštevanjem standardiziranih postopkov pranja raziskovalci zagotovijo, da so pogoji dosledni med poskusi in med različnimi laboratoriji. Ta doslednost je ključnega pomena za pridobitev zanesljivih in ponovljivih rezultatov.

Postopek izpiranja lahko vključuje uporabo večkanalne pipete ali avtomatskega pralnika plošč za odmerjanje in aspiracijo pufra za izpiranje. Pralni pufer je običajno pufrana fiziološka raztopina, ki je po sestavi podobna prvotnemu pufru, uporabljenemu v testu, vendar ne vsebuje reakcijskih komponent.

Ustrezno umivanje brez pretiravanja je ključnega pomena. Prekomerno pranje lahko povzroči izgubo bistvenih komponent, vezanih na trdno fazo, in vpliva na občutljivost testa. Zato so protokoli pranja skrbno zasnovani za doseganje optimalne odstranitve nezaželenih snovi ob ohranjanju celovitosti imobiliziranih molekul ali zanimivih analitov.