Verižna reakcija s polimerazo ali PCR , je mordanajbolj pomemben znanstveni preboj v genetskih raziskav. Kary Mullins izumil PCR v letu 1985 .PCR postopek znanstvenikom omogoča pomnoževanje specifičnih področij DNK , ki proizvaja milijone izvodov, v nekaj urah. PCR zaposluje toplotno stabilen encim Taq polimerazo izolirali iz bakterijskih vrst, imenovanih Thermus aquaticus , ki se nahajajo živijo v toplih vrelcih . V prisotnosti surovin , Taq polimeraza sintetizira dvojnike DNA z izvirno DNA kot šablono . Raziskovalci more določiti natančnega področja DNK treba dopolniti z vključitvijo 20 baznih verige DNK , imenovanih primerji . Primerji sproži ojačanja s seznanjanjem ali žarjenje , da ujemanje niza podlag za matrične DNA . Vse nove tehnologije, razvite od leta 1985 zahtevalo nekaj derivat pomnoževanje . Sekvenciranje
zaporedja DNK, tehnike
DNA natančno določi vrstni red dušikovih baz . Zgodnji razvoj metod za določanje zaporedja označila vsak sloj z radioaktivno oznako med PCR . Pomnožili DNA bi ločili s pomočjo električnega toka in premikanje po gelu podobnega materiala imenovanega poliakrilamidom . Tehnologija bil omejen z dejstvom, da je vsak sloj sestavek določi v ločenih pasovih ker radioaktivno oznake so enake , če se ga z rentgenskim fotografijo . En pas na gelu smo uporabili za vsako bazo . Razvoj fluorescenčnih barvil avtomatizirano tehnologijo v zgodnjih 1990 , in vsaka baza je bila označena z drugo barvo . Kot podlage premikajo preko gela ,digitalni fotoaparat zabeležili barve in poslal podatke na priloženem računalniškem sistemu . Avtomatizirani zaporedja dovoljeno do 700 baz , ki se določi , v primerjavi z omejitvijo 200 izhodiščnega leta za radioaktivne oznake.
Razvoj kapilare zaporedja
Okoli 1997, DNA sekvenciranje tehnike so se nadalje razvijali z zamenjavo umazane steklene plošče in poliakrilamid s steklenimi kapilar . Raziskovalci niso več potrebni , da pour akrilamida med dvema steklenima ploščama in čakati na tvorbo gela kot poliakrilamidnim pred sekvenciranje . Sekvenciranje je namesto izvedemo z debelo sirup kot derivat polimera poliakrilamida , ki je brizgalke injicirana v votlih steklenih vlaken . Vzorci, ki so še vedno dopolnjena z uporabo PCR in fluorescenčne barve , nato pa samodejno naložen v posamezne kapilare za sekvenciranje . Rezultat je večja avtomatizacija v tehnikah insposobnost, da zaporedje večjega števila vzorcev v krajšem času . Večina človeškega genoma , vsi 9000000000 baze, je bila določena z uporabo kapilarne določanje zaporedja .
Real Time PCR
Po določitvi zaporedja DNK za določen organizem , naslednji cilj raziskave je bil poiskati razlike med organizmi iste in različnih vrst. Eden od razlogov je , da analizira razlike in podobnosti v zaporedju DNA iz različnih vrst; zakaj so ljudje človek in gorile niso. Drug razlog je, da uporabite genetske tehnike za določanje napak ali mutacije , ki povzročajo genetske bolezni. PCR v realnem času uporablja podobno tehniko PCR , ki vključuje dodatno fluorescentno označenih premaz , ki označuje določeno zaporedje. Vsaka napaka v DNA preprečuje označevalec od prileganja k DNA sklopa . Sposobnost za marker za žarjenje se merijo med PCR za ugotavljanje, ali je prisotnamutacija .
Microchip Array tehnologija
Microchip niz analiza je razvila kmalu po PCR v realnem času in se uporablja predvsem za izražanje genov , ali za opredelitev genov v celici aktiven. Ni vsak gen v genom je aktiven . Aktivacijo specifičnih genov določa funkcijo različnih vrst celic v kompleksnih organizmov; Zato kožne celice niso jetrnih celic , npr . Raziskovalci izoliramo proizvod aktivnih genov v obliki RNA , ali mRNA , in uporabo tehnik PCR , da dobimo dopolnilo DNA . DNA vzorec je obdana na ploščo z označenih sond, ki se fluorescirajo v prisotnosti DNA . Plošče , ki se uporabljajo danes, lahko hkrati preizkusili več kot 30.000 vzorcev naenkrat .
Next Generation Zaporedje
najnovejši razvoj na področju tehnologij za analizo DNK, je naslednje generacije sekvencerji . Postopek ni v nasprotju z normalnim sekvenciranje . Vendaroprema je sposobna določanje celotne genomske sekvence, izolirane iz bakterije , 2 milijona baz naenkrat . Proces vključuje emulzija PCR tehniko , ki uporablja DNA inkapsulirano na mikro- kroglic ali kapljic olja . To lahko izboljša učinkovitost običajnih tehnik PCR in omogoča več področja DNA, da pomnožimo istočasno . Pomnožili DNA se nato zaporedje pomočjo specializiranih naslednje generacije sekvencerji . Z razvojem tehnologije, ki se uporablja v genetske raziskave , je genetika postala ena od področij najbolj hitro razvijajočih se znanstvenih raziskav .
Zdravje in Bolezni © https://sl.265health.com