Western blot protokoli

za Zahodni Lisevrsta beljakovin madeža , ki se uporablja v medicinskem področju , biologija laboratorijih in drugih znanstvenih disciplin na dnevni osnovi . Western blots , če so pravilno izvedene , sonačin študija proteinski izraz v vzorcih tkiv . Ker lahko pride do razlike v parametrih v vsakem vzorcu , obstaja več protokolov, ki jih je treba upoštevati , da bi dobili natančne rezultate . Performing pranjih

Po inkubaciji membrane v rešitev protiteles za ustrezno količino časa , ki se spreminja odvisno od tega, protitelesa rešitev se uporablja , EnCor Biotehnologija navaja, da naj bimembrana opraviti tri sobni temperaturi opere v TBS . TBS jerešitev, ki ima poseben ličila in pH za pranje . Membrana je treba oprati med vsako uvedbo nove rešitve protiteles.
Priprava barvanjem Mešanica

Po WesternBlotting.org , pripravo mešanice za obarvanje tik pred uporabo to, da je član bodo dosegli najboljše rezultate . Obstaja več vrst Raztopine za obarvanje , od katerih so nekatere lahko kupljeni in nekateri , ki jih je treba zmešati v laboratoriju . Kemiluminescenca madeži , po EnCor biotehnologijo , nudi največ informacij na madež , ampak je tudinajdražji in zahteva temnico za razvijanje . Hren Peroxidase obarvanje in alkalna fosfataza -blot so druge možnosti za obarvanje. Ne glede na to , ki se uporablja metoda , pripravi mešanice tik pred uporabo , je bistvenega pomena .
Uporaba Buffer

Po uporabi izbrano raztopino barvila , uporabo vbuffer je ključnega pomena. V kemiluminiscenčno barvanja, nanašanje acetat v vrhu raztopino barvila je protokol , po katerem WesternBlotting.org . Hren Peroxidase obarvanje zahteva uporabo pufra amonijevega acetata , da bi pridobili rjavo obarvanje izdelek . Pufer se uporablja v alkalna fosfataza blot , ki naj bi ustvarili vijolično obarvanje izdelek , je bolj zapletena , da bi , in jih je mogoče kupiti že .