Kako postavo DNK za analizo ?

Elektroforezo v agaroznem gelu jenajbolj običajna metoda za vizualno analizo fragmentov DNA , ki omogoča tehniki vizualno zaznati fragmentov DNK , ki temelji na velikosti. Agarozni gel utrpi magnetno polje in , ker ima DNA negativen naboj , se pomika proti pozitivni konec magnetnega polja . Manjše fragmente DNA hitreje premikati po gelu in večji delci premikajo počasneje . DNA fragmenti so fluorescentno obarvamo z interkalacijski sredstvom, znanim, kot etidijevim bromidom . To omogoča primerjavo številnih elektroforezo vzorcev DNK na gel . Tisto, kar potrebujete
agarozni gel, s 0,7 odstotka na 2 odstotka jezik Tris- borat - EDTA ( TBA ) , tris - acetat - EDTA ( TAE ), natrijev acetat litij ( LA ) , borova kislina ( SB) varovalni
Etidijev bromid
Gel Nalaganje Dye
Gel pladenj
elektroforeza komore se
Rokavice
zaščitna očala
Odpipetirajte
elektroforeza glavnik
Prikaži več Instructions
Priprava za 0,7 odstotka agaroznem gelu
1

odtehtamo 0,7 grama agaroznem prahu in nato postavite v velikih (250 ml ) erlenmajerico.
2

Dodaj 100ml a 1X (redni moč ) pufru ( TAE , KME , SB ali LB buffer ) v erlenmajerici agarozni prahu .
3

Mikrovalovna ali toplote s pomočjo Bunsenov gorilnik za približno eno minut , dokler se raztopina zbistri inagaroze raztopi .
4

bučko odstranimo iz vira toplote in pustite, da se ohladi na 55 do 60 stopinj Celzija .
5

Dodajte 1 p ( mikrolitral ) z etidijevim bromidom ohlajeni raztopine agaroze z uporabo ustrezne velikosti kapalko , ponavadi 1ml . Premešajte raztopino , da se pomešajo .
6

Pour gel počasi v pladenj za gel , ki zagotavlja, da ni zračnih mehurčkov v tem procesu. Če ni dobavljeno dobro jezovi s pladnja gel uporabljajte lepilni trak , da jih oblikujejo .
7

Dodaj elektroforezi glavnik skrbno v gel , ki zagotavlja trdno stališče in v pravi smeri . Elektroforeza glavniki lahko zelo razlikuje od števila zob , ki ga imajo . Pustite gel nastavljen za približno 25 minut
8

Potopite gel v istem pufru , ki se uporablja za pripravo agaorse rešitev - . V tem primeru , je 1x pufer . Potapljajte gel do 5 ml pufra .
Priprava in Nalaganje DNA v agaroznem gelu za analizo
9

Transfer od 5 do 10 p.L vaš vzorec ( -i) od svojih epruvetah do svežih cevi . V primeru, da želite uporabljati celotno reakcijsko zmes ,sveže cev ni potrebna .
10

Dodaj 0.2X pufra za vsako od vaših svežih epruvetami za vzorce , ki vsebujejo svoj ​​vzorec DNK za nakladanje .

11

Odstranite elektroforeza glavnikom počasi , zagotavlja, da ne boste prekinili gela ali ustvarja prostor med dnom gela in pladenj gel .
12

Dodajte pet 12 p.L ustrezno DNA markerjanajprej elektroforezne glavnik dobro proizvedena . Ali neoznačevalec DNA je primerno, odvisno od velikosti fragmentov , ki jih pričakujejo od svojega vzorca .
13

Vstavite pet do 10 ml vaših vzorcev v preostale vodnjakov in dodajteenako znesek istega označevalec DNA v končnem vodnjaka .
14

Postavite elektrode v elektroforeza komoro s priklopom žic v pravilne vtičnice v komori in nastavite elektrodo za 50 do 150 V.

15

Pustitegel za vožnjo od enega do štiri ure.
analiza rezultatov
16

odstranite gel iz gela komore in ga postavite bodisi v UV prostor za vizualno identifikacijo ali kraj v stroj, ki je sposoben , da bi fotografijo gela .
17

Izmerite razdaljo označevalci migracij v svojih vodnjakov .

18

grafu razdalje pred velikosti pasov na semilog grafu in narišite najustreznejšo črto .
19

Izračunajte razdaljo vaših neznanih pasovih.

20

Ocenite velikosti vaše neznanih pasovih z risanjem črte navzgor od prevožene razdalje , ki vam neznanih bendov, ki izpolnjuje linijo najbolj ustreza .
21

Narišite še eno črto s tem stičišču prenesejo v velikosti osi.