Cell - Based ELISA protokol

ELISA ali- encimski imunski preizkus , ki se uporabljajo kot diagnostično orodje v medicini in v bioloških raziskavah količinsko količino določenega proteina . ELISA uporablja protitelesi za določanje zanimivi protein in reagent, ki proizvaja barvo . Količina barve se nanaša na količino proteina . Celična kultura

Celice naj se postavi v vdolbino 96 vdolbinami s 100 mikro litrov medijev rasti in celic, ki ostanejo čez noč rešiti . Če ste študira odzivcelic 'to dejavnik , naj se celice , serum stradajo 24 ur, nato spodbujena s faktorjem v raziskavi.
Fixation in primarno protitelo

po odstranitvi medijev , so celice obdelamo z fiksativ kot 3 odstotke formaldehidom ali metanola . Imamembrana , ki se permeabiliziramo , daprotitelo prodrejo v celico . Permeabilnosti je mogoče doseči z uporabo 0,1 odstotka Triton , če ni bilo prej uporabljen metanol . Nespecifično vezavo lahko preprečimo z uporabo 10 -odstotnega fetalnega telečjega seruma , razredčene v fosfatnem pufru s soljo . Po odstranitvi bloka , lahkoprimarno protitelo, ki se uporabljajo , in inkubiramo eno uro .
Sekundarnih protiteles in Stain

Odstranite primarna protitelesa in pranje trikrat . Dodajanje sekundarno protitelo vezano na sredstvo za odkrivanje kot hrenovo peroksidazo . Inkubiramo eno uro . Pralni Dodaj kemiluminescenčnega raztopine substrata . Razviti in skeniranje ploščo za intenzivnost barve .