Retrovirus Okužba Protokoli

ki vsebujejo RNA genoma , ki je vključena v kapsidi in ovojnico lipidov , retrovirusi vsebujejo polipeptidne verige, ki jih tudi pomaga povezati na receptorje v membranah celic gostiteljic jih okužijo . Ker je dedna informacija večini celic " kodirani v DNK , da v retro je vsebovana v RNA ; retrovirusi tako izvajajoencima reverzne transkriptaze , ki jim omogoča , da pristopijo k DNK gostiteljice. Nekateri protokoli sledijo laboratorije v namensko okužbo celice DNK s temi virusi . Priprava Laboratory

določene laboratorijske opreme in materiala so potrebni za pomoč pri procesu retrovirusne okužbe . Oprema vključuje 1 pomoč pipete , 1 pipete Človek, kultura pokrov 1 tkivo, 37 stopinj Celzija in 32 stopinj Celzija inkubatorjev in Eppendorfovi centrifuge . Zaloge vključujejo kulturo plošče tkivo, enkratno Pasteur pipete , usposobljeno retrovirusni supernatant - filter sterilizirano polybrene in filter sterilizirana protamin sulfat .
Priprava celic za okužbo

Prior za okužbo , je treba ciljne celice razdeli na tkivno kulturo plošči in inkubirali preko noči pri 37 stopinj Celzija inkubatorja s petimi odstotkov emisij CO2 . Namen inkubaciji je ustvariti celice, ki so 50 % konfluentne . Priprava celic vnaprej je treba zagotoviti, da so celice optimizirana za proces okužbe . Nolan Lab na univerzi Stanford priporoča, da se okužba celic vedno začne začetek s okužba NIH 3T3 , da pomaga optimizirati rezultate testa .
Okužil celice

po inkubaciji je več , je treba zagotoviti, da raziskovalci so celice tako zdrav in desni izliva . Uporaba pokrov za tkivne kulture , ki jecelični zadeva izsesali,virusna supernatant je bil uporabljen za celice . Ko se uporablja , je trebaploščo nežno zibati naprej in nazaj , da se zagotovi , da je enakomerno porazdeljena. Celic, mora potem biti spin nacepili jih položimo v Eppendorf centrifugo in jih vrti pri 2500 obratih na minuto devetdeset minut pri temperaturi 30 stopinj Celzija . Zatem je treba celice inkubiramo pri 32 stopinjah Celzija za 01:59 dni . Virus se nato nadomestijo z izločenih celic in damo v inkubator za analizo kjerkoli 3-7 dni po prvi okužbi .