Cell Zamrzovanje protokol

Ohranjanje celice skozi zamrznitev je ključnega pomena za raziskave , veterine in reja živali , saj omogoča celice , ki se shranjujejo dalj časa. Postopek zamrzovanja izbrana , pa mora zmanjšati ali preprečiti škodo na celici . Krioprezervacija sredstvo in način more biti odvisna od vrste celic. Priprava

Celice naj se zamrznejo , če so zdravi in ​​aktivno raste z 90 -odstotno uspešnega a. Paziti je treba na ravnanje in visoke hitrosti centrifugiranja in živahna pipetiranje ali sesanjem se je treba izogibati , da se ohrani sposobnost preživetja in preprečuje poškodbe celic .
Cryoprotection

cryoprotection agent kot nadomestilo za znotrajcelično vodo . Sredstvo preprečuje ledenih kristalov in dehidracija , ki se pojavljajo v celicah . Sterilizirano glicerol in sterilizirano dimetilsulfoksida se pogosto uporabljajo v koncentraciji 5 odstotkov na 15 odstotkov ( volumen na volumen ) razredčene v obeh fetalni telečji serum ali medija rasti , odvisno od vrste celic.
Zamrzovanjem in skladiščenje

Celice v ledenem zmesi bi bilo treba počasi ohladili . Čeprogramabilni zamrzovalnik ni na voljo , se lahko kriofiol treba zaviti v tkivu ali namestiti v stiropor , ki lahko upočasnijo proces zamrzovanja . Celice je treba hraniti pri minus 80 stopinjah Celzija za 24 ur in nato prenese na tekočem dušiku za dolgoročno skladiščenje .
Odtaljevanja

Zamrznjene celice naj se hitro odmrznjeni . Lahko uporabimo v vodni kopeli pri 37 stopinjah Celzija . Paziti je treba s celicami , shranjene v tekočem dušiku , vendar pa, kot lahko tekoči dušik vnesite vial in lahko eksplodirajo, odmrznjena . Zamrzovanje Mešanico je treba razredčiti v medijih rasti. Celica preživetja , je treba oceniti z Trypan barve modro in celice gojijo kot običajno .