Celično lizo protokol za proteinov

lahko majhne proteine ​​pripravimo sintetično , vendar zaradi številnih razlogov ni sintetični stroji boljša od same celice . Značilno je, da je prvi korak v izolacijo proteina je celično lizo . Razpad celic

V razpad celic ,membrano, ki obdaja celične prelomov .

beseda " razpada " izhaja iz grške korenin smislu ", da odstopi. " V celične lize, da se sile , ki imajo celične membrane skupaj moten , povzroči, da se razpoči . Vsebina celice se nato spusti v raztopino , ki obdaja , vključno zanimivi protein . Ponavadi se to izvaja z dodajanjem kemične raztopine imenovano liza buffer .
Priprava liznega pufra kupi izbiro liznega pufra bo odvisna od vrste celic , proteina in uporabo .

nešteto različnih LYSIS rešitve so na voljo na tržišču , ali skupne recepti se lahko uporabljajo za pripravo liznega pufra iz skupnih kemikalij. Najboljši pufer za uporabo bo odvisen od vrste celic , protein izolirani in končno uporabo , vendar pa na splošnolizna raztopina vsebuje molekulo pralna sredstva ( pogosto NP - 40 ali Triton -X) , ki se raztopi celico membrana , skupaj z odbojniki , kelatorjih in zaviralci proteaz , ki preprečujejo beljakovin pred poškodbami , ko se sproščajo iz zaščitnega okolje celice .

LYSIS Pogoji
Performing liza pod ledeno mrzle pogoji preprečuje poškodbe na zanimivi protein .

Lizni pufer se običajno uporablja ledeno hladno , inpostopek ramo lahko poteka na hladnem . Raztopino rahlo zaniha spodbuditi tudi disperzijo celic in lizirnega izdelkov . Po približno 5 do 10 minut , jelizna raztopina običajno nevtralizirati , da se prepreči nadaljnje aktivnosti . Ti ukrepi zmanjšati škodo beljakovin in zmanjšati količino tuje razbitin, ki bodo kasneje morali odstraniti.
Drugi LYSIS Metode
Mehanska sila se lahko uporablja tudi za lizira celice .

lahko Čeprav kemična lizagentlest in najpogosteje uporablja , se uporablja hujše mehanske metode za liziranje celic, ki v nekaterih primerih . Ti vključujejo sonifikaciji večkratnih ciklih zamrzovanje-odtaljevanje in homogenacijski , ki jeproces mashing . Posvetujejo s strokovno literaturo , da bi našli najbolj primerno metodo za vašo konkretnem primeru .