Biotinilacijo Protokoli

biotinilacijo jepostopek povezovanja biotinom ali vitamin H , na protein ali drugih molekul . Ta znanstveni postopek se uporablja predvsem na področju biotehnologije in molekularne biologije raziskave, ki vključujejo DNA, proteine ​​in antigeni, ki so molekule imunski sistem telesa prepoznajo kot vsiljivci. Biotinilacijo protokoli vključujejo biotinilacijo protiteles in peptidov , kakor tudi na celični površini biotinilacijo . Biotinilacijo protiteles

povezavo biotin , da protitelesa proteinov proizvodnjo koantigen vstopi v telo , strokovnjaki uporabo natrijevega bikarbonata ( NaHC03 ) pri pH 9; dimetilsulfoksid ( DMSO);

NHS - biotin inslanica snov, imenovana PBS . Vzorce zmešamo z natrijevim bikarbonatom , ki je kasneje dodan NHS - biotin v DMSO . Raztopino nato dodamo na analiziranih protiteles in inkubirali na kos opreme imenovanega rotator štiri ure pri sobni temperaturi in preko noči pri 39,2 stopinj Celzija . Končno , raztopino razredčimo s PBS .
Celični površini biotinilacijo

V biotinilacijo protokola površini celice , strokovnjaki uporabo tkivnih kulturah s fosfatnim pufrom (PBS ) na pH 7,4 in sulfosukcinimidil -2 - ( biotinamido ) etil - 1 ,3 - dithiopropionate buffer rešitev za uravnoteženje kislost , ki vsebuje amino skupine in TrisCl , v skladu z veljavnimi protokoli z beljakovinami Science.The celice so pomešani z biotinom in puferske raztopine , dekantirane in centrifugiramo . Trdna vsebina in posebne beljakovine so kasneje analizirali na gel elektroforeza ploščo .
Biotinilacijo peptidov

Za opravljanje biotinilacijo peptidov ,reagent je NHS SS - biotin , po Philip Shepherd v " monoklonska protitelesa : .Practical Approach " Peptide fragmentov aminokislin molekule , ki tvorijo proteinov in DNA . V tem protokolom , jeposlovna rešitev NHS -SS Biotin raztopimo v vodi. Nato sevzorec peptid doda , skupaj z natrijevim bikarbonatom za uravnoteženje kislost ali pH . Raztopino nato inkubirali na ledu za dve uri . Tehniki lahko opazujemo vzorec z ali brez molekul, biotin .