Protokoli za Hoechst barvanjem

Hoechst madeži so fluorescentne barve , ki se uporabljajo za označevanje DNA in RNA s fluorescenčno mikroskopijo in pretočno citometrijo tehnike . Hoechst 33258 in Hoechst 33342 , sonajpogosteje uporabljena teh madežev . Imajo sposobnost, da se veže na DNK molekule , ki povzroča jedra in mitohondriji pojavljati fluorescenčen pod ultravijolično svetlobo . Protokoli za Hoechst madeži so običajna praksa v biotehnoloških in genetskih laboratorijih , in vključuje mobilni kontrastne tehnike, ki uporabljajo tako Hoechst 33258 in Hoechst 33342 . Hoechst 33342 HSC obarvanje in Stem Cell Purification protokol

Ta protokol se uporablja za madež celic iz kostnega mozga miši . Tehniki pripravijo vzorec kostnega mozga, z raztopino HBSS + soli, HEPES pufra in fetalni telečji serum . Vrtijo rešitev in dodali, da je predhodno segreli DMEM mediju. Nato dodamo Hoechst madež . Rešitev je postavljena na 98,6 stopinje Celzija vodno kopel za točno 90 minut , poročaOddelek za imunologijo na univerzi v Pittsburghu. Pojavljajo segmenti DNK fluorescentna pod citometru .
Hoechst 33342 DNA obarvanje

V tem protokolu , tehniki začasno Hoechst 33342 madež v destilirano vodo , dodamo 2 odstotni fetalnega telečjega seruma za celični vzorec , držimo pH na 7,2 s pomočjo puferske raztopine . Celice se nato inkubirajo pri 98,6 stopinj F za eno uro , in takoj analizirajo z delom opreme , imenovane citometrom .

Stained DNA je nato vidno in fluorescentno, glede na University of Michigan zdravstvenega sistema .


zaznavanja DNA Uporaba DNA vezavo fluorokromnega Hoechst 33258

protokoli , ki se uporablja kos opreme , imenovano spektrometer za analizo DNK in RNK segmentov. Tehniki uporabo Hoechst 33258 delovnih rešitev in telečji priželjc vzorce DNK . Prav tako bi ločeno rešitev z uporabo vzorec DNK in kemikalijo , imenovano etidiijev bromid . Kasneje so primerjali rezultate barvanje celic v obeh medijih , se uporablja spektrofotometer , v skladu z veljavnimi protokoli v Cytometry .