Tkivna kultura Tips

tkivni kulturi , da razmnoževanje celic v tekočem mediju rasti v laboratoriju za različne znanstvene namene . Na primer, tkivne kulture uporabljajo v diagnozo genetske bolezni , kot medija za gojenje znotrajcelične mikroorganizmi, kot so bakterije ali virusi ali v preiskavah v samih celicah . Tkivna kultura celice

Nekatere celice držijo dna petrijevke ali ostane suspendirana v tekočini . Celice so lahko rastlinskega ali živalskega izvora . Celice , ki se uporabljajo v tkivnih kulturah lahko primarne celice , kar pomeni, da so bile pobrane neposredno iz organizma , ali celične linije , ki je bil vzdrževan v kulturi . Celične linije so pogosto rakave celice , in to je treba upoštevati pri načrtovanju ali tolmačenje poskusov.
Privoščite celice nežno

Prilepljene celice , vzete iz njihove petrijevki za prehod z strganjem ali proteaze , splošno tripsinu in EDTA . Strganje ubije veliko celice in jih je treba uporabljati le pri pripravi celični lizati ( tekočih pripravkov celičnih vsebin za analizo ) ali , če je treba nujno preprečiti tripsin /EDTA .

Trypsinizing odstrani ne samo beljakovine, ki držijo celice na krožnik vendar je večina drugih proteinov na membrano celice tudi. Celice žogo in traja nekaj časa , običajno čez noč , da se ponovno vzpostavi vez s krožnika . Dodajanje minimalno količino tripsina - približno 1 ml za 25cm2 bučko - premikanju bučko za pet sekund ali manj na plaščenoslojne in nato izlivanjem ali izsesavanje odvečno tripsina bo zmanjšala količina tripsina , ki je izpostavljenenoplastna . Naj celice počivati ​​v inkubatorju med tripsiniranju .

Po celice slide off dno posode , dodajte medij s serumom in sesanje lizata, gor in dol po pipeto nežno. Pustimo, da malo medijev , da ostanejo v posodi , kot ste pipete gor in dol večkrat razpad kepe in dobili celo prekinitev .

Ne sesati mehurčkov v pipeto . Prav tako ne močno mešajte Vortex celične suspenzije; celice so zelo šibke v tem obdajajoče -up stanju .
za ogrevanje deaktivirajo ali ne segrevajte deaktivirajo

Ko so tehnike celične kulture v povojih , fetalni goveji serum ( FBS ) je znano, da vsebuje komplementa proteine ​​, ki so v delovanju imunskega sistema proteini , ki razkrajajo celic. Dopolnjujejo proteini niso zaželene v celični kulturi . Toplotno inaktivaciji FBS pri 56 stopinjah Celzija 30 minut bo postala komplementa beljakovine neaktivne . Prewarming FBS do 37 stopinj C , je tudi dovolj , da inaktiviramo komplementa beljakovine .

V prvih dneh , toplota inaktivaciji FBS ubit tudi Mycoplasma in drugih onesnaževalcev . Takrat je sterilizacija filter izvedemo z 0.45um filtri . Danes filter sterilizirajte FBS in medijev skozi 0.1um ali celo 0.04um filtrov. Ne Mycoplasma bo porinil , da

To nam pušča vprašanje, ali toploto deaktivirajo

Heat inaktivaciji razgrajuje vse sestavne dele FBS - . . Kot so vitamini , aminokisline in rastnih faktorjev - . morda pod pragom za nekatere finicky celičnih linij

Če delate s celično linijo počasi raste ali finicky , razmislite samo filter za sterilizacijo svoje FBS . Morda boste našli kar povečuje trdnost svoje celice .