Odpravljanje za gelsko elektroforezo

poliakrilamidni gel elektroforezo , ali na strani , jetehnika pogosto uporablja za ločevanje organskih molekul v biološkem vzorcu . Molekul z nižjo velikosti in teže migrirajo hitreje na poliakrilamidnem gelu , ko je električni tok . Jasno različni pasovi so navadno opazili , ko jekončan gel inkubirali v določenem madež. To jerelativno enostaven način . Vendar pa lahko odsotnost trakovi ali trakovi , ki Smear ali so nečist pomeni težave v enem ali več korakih metode . Moral bi slediti osnovne smernice za odpravljanje metodo elektroforezo v gelu , če niso v skladu s pričakovanji vaši rezultati . Tisto, kar potrebujete
kakovostni razred bis : akrilamida ali Montažni ploščah Neomejeno dveh steklenih plošč Neomejeno Akrilamid : Bis
TBE pufru ( TRIS , borova kislina , EDTA )
Napajanje
Upper buffer komora
Spodnja buffer komora
beljakovin v vzorcu DNK
TEMED
amonijev persulfat
Gel madež
Proste Prikaži več navodil

1

Začnite z zadnji korak gelsko elektroforezo prva in delo nazaj . Za gelsko elektroforezo ,Končni korak jepostopek barvanja prodano vzorčne trakove . Nekaj ​​težav naj bi med postopkom barvanja dejansko pride . Vendar pa je treba madeže prahu dobro raztopimo v ustreznem pufru , preden se jih uporablja , da obarvamo gel . Izvedeti, je bila uporabljenapravilna koncentracija madež.
2

Preverite napajanje . Odsotnost pasov bi lahko pomenilo,tok ali napetost nastavitev je bila previsoka in so preiskovani vzorci izselili off gel . Visoke nastavitve pa lahko povzroči tudi komponente iz vzorca, ki migrirajo skozi gel prehitro , povzroča slabo resolucijo in trakovi , ki se pojavijo nečisto. Vzorci ne smejo migrirajo skozi gel , če je nastavitevnapajanja nizka . Vzorci lahko odneslo tudi iz vodnjaka , kjer so bili naloženi in ne migrirajo skozi gel.
3

Preverite tekoče akrilamida , ki se uporablja , da odda Poliakrilamidni gel . Značilno je, da je odstotek akrilamida uporablja odda poliakrilamidnem gelu v območju 5 do 15 odstotkov . Vzorci, ki so sestavljeni iz večjih molekul so naloženi na 5 -odstotnim gelom , ker večji delci premikajo počasneje od gelov z višjim odstotkom akrilamida . Majhne molekule so naloženi na višji odstotnim gelom , ker koncentracijanizka gela naj ne bi bila sposobna reševati manjše vzorce .
4

Preverite reagentov polimerizira v akrilamida . Poliakrilamid gel s polimerizacijo tekoče zmesi , ki sestoji iz bisakrilamida in akrilamida . Amonijev persulfat in TEMED se prištejejo k akrilamida , ki katalizira tvorbo gela . Značilno je, da je trebaakrilamid kažejo znakov polimerizacije ( nastanka gela ) 15 minut po dodatku amonijevega persulfata in TEMED . Polimerizacija da pride prehitro jeposledica velike količine amonijevega persulfata . Premalo amonijev persulfat lahko povzroči nepopolno ali neenakomerno polimerizacijo .
5

Potrdite količino vzorcev obremenjenih . Visoke koncentracije vzorcev lahko premikajo počasi skozi gel in zmanjšanje ločljivosti pasu . Koncentracijavzorca , ki je nizka ni mogoče opaziti , potem ko je bilgel obarvamo . Te Madeže omejitve glede minimalne količine vzorca, ki se lahko posnel kot posledica občutljivosti madež .
6

kakovost potrditev vzorcev obremenjenih . Soli in drugih onesnaževalcev v vzorcu lahko vpliva na gibanje vzorca vzdolž gela . Elektroforeza jeposledica električnega toka , ki teče skozi gel , ki vsebuje prevodni pufra; Visoke koncentracije soli v vzorcu lahko vpliva na gibanje tega toka skozi gel . Vaš izolacija vzorca mora vključevati čistilni komplet , ki bo dosegla relativno čisto vzorec .
7

Pregled literature alipisni protokol se ugotovi, ali je bilapravilna STRAN uporablja za izvajanje poskusa . Odstotek akrilamida v strani je posebna velikosti vzorca , ki se preskuša . Literature bi lahko tudi posebne informacije v zvezi z ustanovila oskrbe z električno energijo in stopnja migracije vzorca .