Kako madež agarozni geli,

Vizualizacija nukleinske kisline ali beljakovin je bistvenega pomena pri opravljanju elektroforezo na agaroznem gelu . Če delate brez obarvanje gel , ne boste mogli videti, kje jevzorec , ki ga je dosegel testiranje , in zato meritve molekularne velikosti, na primer , se bo strogo omejena . Zamažejo gel z uporabo skupnega , dobro preizkušen , barvilo kot etidijev bromid ( EtBr ), ki fluorescira pod ultravijolično (UV ) svetlobo , ko so vrinjeni v DNA ali RNA molekule. Dye vam bodo pomagali pri izvedbi poskusa , ki ga prikazuje molekule v vzorcu, kot je temno modrimi oznakami. Tisto, kar potrebujete
zaščitne rokavice in očala
agaroznem gelu
Etidijev bromid
pipete ( Gilson za majhne količine )
Nalaganje buffer
Proste Prikaži več navodil

1

Nositi zaščitne rokavice , ki so tanka, vendar zaščitna in dovolite prstov in rok neomejeno gibanje. Uporabite majhno pipeto , da pripravi nekaj EtBr (ali enakovredno madež ) iz posode.
2

Dodajte 0,5 mikrogramov na mililiter izbranega madež na vašem vzorcu. Vzorec pokrije in premešamo ročno. Več trese bi moralo biti dovolj .
3

Dodaj negativno nabitih pufra v mešanici z uporabo pipete . To omogočaobarvajo vzorec , ki se vidi s prostim očesom , v naravne svetlobe in odpravlja potrebo po dragih , škodljivim UV , ki bi sicer razgradijo molekule , ki vas zanima . Ksilen cyanol sepogosto uporablja za nakladanje buffer , druge pa so na voljo. Zagotovitev izberete pufra , ki bo potekal z enako hitrostjo kot v molekuli , ki ga merjenje . Ksilen cyanol teče z enako hitrostjo , kot je DNA fragmentov, ki so 5000 baznih parov ( bp ), v dolžino .
4

S čisto pipeto uporabljati svoj ​​okrepljeno vzorec vdolbinic na začetku vašega agaroznem gelu . Obseg ga uporablja odvisna od velikosti gela glavnikov ( ter debeline in dolžino in debelino gel ) . Zamažejo vzorec, in nenadzora, tako da boste lahko določi parametre , ki vas zanimajo (npr. molekulsko maso ), pravilno in učinkovito .
5

Druga možnost je , izvesti po Southemu kot način za vizualizacijo svoj ​​vzorec . Prenos DNA na nitrocelulozno membrano . Izpostavljajte sondo hibridizacije . To se ne obarva , kot taka , ampak zagotavlja ustrezno alternativo , kot je dostop odličnosti opisal .