N-terminalni konec zaporedja protokol

Edman razgradnje -znana Postopek za identifikacijo N - terminalno aminokislino proteina - zahteva cepitev aminokisline , čemur sledi identifikacija uporabo kromatografije ali elektroforezo . Avtomatizirani procesi pospešijo N - terminalno zaporedje delovanja . Dejstva

Proteini, proizvedeni znotraj posameznih celicah, ki delujejo kot hormoni , encimi in drugih pomembnih regulatorjev . Genska mutacija posledico nenormalno proteina lahko resne posledice za zdravje .
Postopek

jeaminokislina N -terminalno cepimo z obdelavo z eno izmed več reagentov , nato hidroliziramo da se tvori ločen aminokislino . Tankoplastna kromatografija , HPLC ali elektroforezo določa velikost amino kisline , in ga primerja z znano standardne velikosti . Novi N - terminalni konec preostale beljakovine, se lahko prav tako razklani za identifikacijo.

Avtomatizacija

Applied Biosystems vodil razvoj avtomatizacijo degradacije Edmanovem , ki veže očiščenega proteina na membrano in jo zdravi z phenylisothiocyanate . Proste amino kisline je samodejno vbrizga v HPLC sistem za identifikacijo.
Zapleti

Beljakovine mora ostati relativno čisto in brez onesnaževalcev natančno določiti N - terminalno aminokislino . Meje Edman razgradnih zahtevajo velike beljakovinske molekule razdrobljena na majhne peptidnih verig ne več 50 aminokislin .