Kako meriti viabilnost celic

V večini bioloških poskusov, ki vključujejo celično kulturo ,pomemben korak vključuje vedo, katere celice so žive in mrtve , ki so v vašem vzorcu. Dye izključitev jenajbolj priljubljena metoda za merjenje viabilnosti celic . Dye izključitev temelji na teoriji, da žive celice vsebujejo nedotaknjena membran in odmrle celice , ne , tako mrtve celice absorbirajo barvila v citoplazmo . Obstajajo različne barve in Protokoli in metode, ki jih izberete, mora temeljiti na stroških , občutljivost, enostavnost in trajanje postopka. Trypan Blue jeskupna barvilo za merjenje preživetja celice, ker sepostopek lahko opravi v petih do 10 minut in stane le količine reagenta barvila . Tisto, kar potrebujete
0,4 % Trypan modro reagenta
hemacitometrom
Cover slip
mikropipeta
Pipetirajte nasvetov
fosfatnim pufrom ( PBS )
mikroskopom svetlobe jezik
Pokaži več navodil

1

pridobiti pelet celic ste merilnimi .
2

Resuspendirajtecelični pelet v PBS , da bi dobili približno 5 x 105 celic /ml . PBS se uporablja, ker so meritve viabilnosti bolj natančno, ko so celice v okolju brez seruma ; serumskih beljakovin lahko tudi madež in vam zavajajoče rezultate .
3

Dodaj enakih delih suspenzije celic v PBS do enakih delov za 0,4% Trypan modro barvilo , da dobimo 1 do 2, redčenje (primer : . 100 ul celic na jamico 100 Trypan Blue) in mešanju s premikanjem pipete gor in dol
4

Inkubiramo zmes za manj kot treh minutah pri sobni temperaturi . Če so celice štejejo po približno petih minutah , se bo sposobnost preživetja netočne zaradi celične smrti .
5

Z mobilnim zdrsa že v mestu, izpolnite vsako stran hemacitometrom števec s suspenzijo celic. Značilno je, da bo vsaka stran bo 10 do 20 ul .
6

Postavite hemacitometrom na odru svetlobnim mikroskopom in se osredotočiti na celicah.
7

vsaki strani hemacitometrom vsebuje več kvadratov. Štetje je skupno število celic v enem kvadratu hemacitometrom . Nato prešteti niso izvedljive ( modra) in živih celic (brisanje) ločeno , v istem trgu .
8.

Izračunamo odstotek živih celic na trgu tako, da se število živih celic s številom vseh celic in pomnoži s 100. . Ali to za več kvadratov na hemacitometrom doseči povprečno merjenje uspešnosti poslovanja .