PCR Osnove

verižno reakcijo s polimerazo ( PCR) jemetoda replikacije DNA . Postopek se imenuje po DNA polimerazo , encim, ki se uporablja za katalizo proces replikacije DNK . Kary Mullis razvil tehniko leta 1984 in je bil nagrajen z Nobelovo nagrado za kemijo za svoje delo leta 1993 . Aplikacije PCR

Skupne aplikacije PCR vključujejo odvzem prstnih odtisov DNA ( v katerem so fragmenti DNA izolirana in primerjajo obstoječi podatki ) , analiza zelo majhne količine vzorcev ( ki omogoča znanstvenikom rekonstruirati izumrlih organizmov in posmrtnega zgodovinske osebnosti ) in diagnosticiranju bolezni ( vključno virusne DNK in raziskave raka ).
PCR Komponente

potrebne sestavine in reagenti PCR reakcije so: genomske DNA (predloga za ponovitev ); dvema primerjema ( eno sprednjo in eno vzvratno ) komplementaren šablonske sekvence DNA; reakcija cocktail ( vključno s Taq polimerazo in puferske raztopine , ki zagotavlja uspešno okolje, v katerem se bo pojavilareakcija ); insubstrat za encim Taq ( nukleotidov , ki bodo pomagali " zgraditi" posamezne pramene ).

Koraki PCR

koraki reakcije so : Denaturacija ( v katerem se temperatura dvigne za ločevanje DNA matrico pramenov ); Žarjenje na primer ( v katerem je temperatura hlajenega spodbuditi prosto plavajočih zaporedja začetnih oligonukleotidov, da pristopijo k izoliranih predloge DNK pramenov ); in Extension ( med katerimiTaq polimeraza spoštuje temeljni premaz in uporablja prosto plavajočih nukleotide posnemati vsako izolirano DNA matrico sklop ) . Ponavljanjem postopka večkrat bo izolirati vsak repliciral zaporedje iz svoje prvotne predloge DNK. Vsaka ponovitev eksponentno poveča količino repliciral DNK , dokler ne bozadostna količina za želeno poskusa. Za optimalno temperaturo in drugih pogojev , glejte " oblikovanju programov PCR " Yale University v vire , spodaj.

Fazah PCR

reakcijo lahko opišemo tudi v treh fazah : Amplification ( v katerem je DNA eksponentno replicira ); Raven - Off (med katerimiTaq polimerazo izgubi dejavnost ); in plato ( in v tem času ni več izdelka se lahko izdelajo v tekočem reakcije ) . Za interaktivne predstavitve PCR reakcije , glejte University of Utah je " PCR Virtual Lab " na vire , spodaj.