Kateri je boljši način za določitev, kdaj raztopina mleka postane bistra v poskusu s tripsinom?

Določanje končne točke poskusa hidrolize tripsina kazeina z opazovanjem, kdaj raztopina postane bistra, je lahko subjektivno in nenatančno. Bolj kvantitativna in natančna metoda je uporaba spektrofotometra za merjenje absorbance raztopine pri določeni valovni dolžini.

Tukaj je izboljšan postopek za določanje končne točke poskusa s tripsinom s spektrofotometrom:

Materiali:

- Raztopina tripsina

- Raztopina kazeinskega substrata

- Raztopina natrijevega hidroksida (NaOH) (0,1 M)

- Spektrofotometer

- Kivete

Postopek:

1. Pripravite reakcijsko zmes:

- V kiveti zmešajte določen volumen raztopine kazeinskega substrata (npr. 1 ml) z ustreznim volumnom raztopine tripsina (npr. 0,1 ml).

- Mešanico inkubirajte pri primerni temperaturi (npr. 37 °C) za želeni čas (npr. nekaj minut).

2. Ustavite reakcijo:

- V določenih časovnih intervalih (npr. vsako minuto) odvzemite majhen volumen reakcijske mešanice (npr. 0,1 ml) in jo prenesite v ločeno kiveto.

- Takoj dodajte zadostno količino raztopine natrijevega hidroksida (npr. 1 ml), da ustavite reakcijo.

3. Izmerite absorpcijo:

- S spektrofotometrom izmerite absorbanco vsake ustavljene reakcijske zmesi pri določeni valovni dolžini (npr. 440 nm).

4. Narišite absorpcijo:

- Narišite graf s časom (x-os) in absorbanco (y-os).

5. Določite končno točko:

- Analizirajte vrednosti absorbance skozi čas. Končna točka je časovna točka, ko absorbanca doseže plato ali se znatno zmanjša, kar kaže na obsežno hidrolizo kazeina.

Ta metoda zagotavlja bolj objektivno in kvantitativno določitev končne točke v primerjavi z vizualnim opazovanjem bistrenja raztopine, saj temelji na merjenju spremembe absorbance zaradi sproščanja manjših peptidov in aminokislin med hidrolizo kazeina.