Metode za merjenje NADPH - oksidaza

je encim NADPH oksidazeopredeljena kot proizvajalec reaktivnih kisikovih med procesi , vključno z razvojem žilnih gladkih mišičnih celic . Te reaktivne vrste so povezana z vrsto bolezni , vključno s hipertenzijo , sladkorno bolezen , rak in vnetje , metode za spremljanje aktivnosti tega encima je ključnega pomena za morebitni razvoj zdravljenja. NADPH oksidaza

NADPH oksidaza spada v družino encimov , ki pomagajo pri prenosu elektronov med NADPH in kisik. Vendar NADPH oksidaze ima edinstveno sposobnost za proizvodnjo reaktivnih kisikovih te reakcije , v primerjavi z drugim članom družine , kjer je reaktivnih kisikovih nastaja z drugimi sredstvi . Multimerni protein kompleks , NADPH oksidaze sestavljajo membransko vezane flavocytochrome b558 , ki se uporablja kot merilni marker .
Kisikovih radikalov ( ROS ) Generation

glavni vir ROS , predvsem vodikovega peroksida , NADPH oksidaza proizvaja majhne količine , vendar so skladne z njegovo izooblike izražene v krvnih žilah , ki so vključene v signalne procese . Ta usklajen proizvodnja lahko sčasoma preplavijo naravni antioksidant sistem , ki povzroča izgubo zaščitnih snovi , kot so dušikov oksid ingeneracija še močnejši ROS .
Kemiluminescenca Metoda

Kemiluminescenca omogoča zelo občutljiv , avtomatsko merjenje aktivnosti NADPH oksidaze preko različnih koncentracijah . V tej metodi se NADPH substrat dodamo vzorcu tkiva , ki vsebuje NADPH oksidaze . Po reakciji ROS generira in reagira s sestavljeno lucigenin da dobimo chemilluminescent učinek , ki se meri . Luminiscenco je direktno proporcionalna aktivnosti NADPH oksidaze , kotencim določa hitrost reakcije .
Kinetične analize s pomočjo pretočne citometrije

V tej metodi , so analizirali vzorce tkiva preko Cytometry toka . Kostnega mozga se izločijo iz vzorca z uporabo Hanksovimi uravnoteženi solni raztopini. Posebne madeži in odkrivanje protiteles pa se doda k vzorcu v polistirenske epruvete. Vzorec se nato inkubiramo , izperemo s Hanksovimi uravnoteženi raztopini soli , označeni s molekularnih sond in pripravimo iz Cytometry pretoka . Kontrolne Izdelane so tudi primerjave in umeriti toka citometrom . Stroj je nato tekel in meritev zabeleži .