NBT Vsebnost Protokoli

NBT ali nitro blue tetrazolijevega jekemična spojina, uporabljena v biokemije in imunologije za odkrivanje encimom alkalno fosfatazo . Snov se uporablja tudi v testu diagnozo kroničnega granulomatozni bolezni , ki vpliva na immunodefense celice . Test protokoli NBT vključuje imuno , BCIP /NBT alkalne fosfataze raztopine substrata in odkrivanje aktozidazo in alkalnih aktivnosti fosfataze v tkivu . Imunoblotanju

imuno je tehnika, ki se uporablja za odkrivanje protiteles , ki so beljakovine , ki sodelujejo v procesu immunodefense , pravi Susan R. Haynes v " RNA - proteinskih interakcij protokolov. " To vključuje uporabo NBT ter albumina govejega seruma , primarni protitelesa 9E10 , Comassie raztopine za obarvanje , nitrocelulozne membrane , Tris baze pufra, amonijev po - sulfat, natrijev dodecilsulfat in nasičena z vodo buthanol .

BCIP /NBT alkalne fosfataze raztopino substrata

Tehniki pripravimo raztopino z tri kapljice 1 odstotkov 5 - bromo - 4 - kloro - 3 - indolil fosfat ( BCIP ) , tri kapljice 1,5 odstotka NBT , dve kapljici kemične snovi levamisol in alkalno fosfatazo ( AP ) pufra pri pH 9,5 , glede na spletni strani IHK svetu. Raztopino nato inkubirali pri sobni temperaturi in na voljo za uporabo .
Odkrivanje aktozidazo in alkalne fosfataze dejavnosti v tkivu

Galactosidases so encimi , ki lahko pretrgajo galaktozid molekula , prisoten v bakterije Escherichia coli in drugih organizmih . V skladu s Protokolom Online , v tem protokolu , biologi uporabljajo vzorce podganjih celic , obdelanih s PBS rešitev , glutaraldehid in paraformaldyde . Potem , pripravljajo bromo - kloro - indolil - galaktopiranozid ali X - gal reakcijskega pufra za vzorce , z uporabo ferociankalijem , magnezijev klorid , natrijev deoksiholat in je čistilno NONIDET P- 40 . Tehniki lahko uporabite nitro modro tetrazolij ( NBT ) namesto ferociankalijem kot hitrejšo alternativo . Celične vzorce se kasneje opazuje pod mikroskopom .