T - Cell Protokoli Kultura

T- celice , ki spadajo v družino imunskih celic, imenovanih limfociti , nastanejo med prilagoditvenega imunskega odziva . T- celice izvirajo iz zarodnih celic kostnega mozga in zorenje v timusu . Obstaja več različnih vrst celic T , ki imajo različne funkcije . T celice so ločeni med seboj z vezanim antigenom receptorjem T - celic . Podskupino celic T CD4 nosi marker in pomaga , da inducira imunski odziv . Viri celic T

T- celice lahko iz različnih virov , vključno vranice , bezgavk , timus , vendar periferne krvi, jenajbolj voljo vir celic T za namene kulture . Krvni vzorci so temeljito pregledani zaradi morebitnih okužb in drugih onesnaževalcev in previdno ravnati v skladu z varnostno omarico . T-celice gojimo zaradi več razlogov , vključno z merjenjem toksičnosti in za študij imunoloških odzivov cepiva.
Izolacija
so

T-celice pogosto ločena od vzorcev polne krvi z gostoto - gradient ločevanje , kot so celice T manj gosto kot rdečih krvnih celic , kot eritrocitov in zato ekstrahiramo s centrifugiranjem . Primerno nevtralna raztopino soli dodamo v vzorcu krvi , ki mu sledi Ficoll isopaque raztopine . Ficoll isopaque ima večjo gostoto od T-celic , vendar manj kot eritrocitov in med centrifugiranjem tvori srednjo plast med obema celic izkoristil T- celice, ki jih je treba odstraniti iz vrha . Celice T so nadalje centrifugiralisupernatant odstranimo inmajhno Alikvot štejemo, da določimo sposobnost preživetja celic . Celice se bodisi uporablja neposredno za poskuse ali cryopreserved za prihodnjo uporabo .
Krioprezervacije

krioprezervacije reagenti so pripravljeni vnaprej , da preprečijo degradacijo T - celic pri sobni temperature . Če to ni mogoče , se celice hranijo na ledu ali v hladilniku . Reagenti so sestavljeni iz medijev kulture celic in 10-13 odstotkov humani serumski albumin ( HSA ) protein , kot tudi kot medij za celično kulturo in 10 odstotkov dimetilsulfoksidu ( DMSO ) . DMSO zmanjšuje dehidracijo, spremembe pH , spremembe koncentracije elektrolitov , povezane z zamrznitvijo . T-celice ponovno suspendirali v mediju celičnih kultur z reagenti , ki vsebuje in HSA v cryotube . DMSO - reagent vsebuje počasi dodamo celicam in rahlo zavrtimo . Celice smo nato prenesli v zamrzovalnem izopropanola posodo, ki vsebuje zagotoviti postopno znižanje temperature in shranijo .
Odmrzovanju

kadar T -celice odtajamo ,cryotube odstranimo iz skladišča in se inkubirajo pri 37 stopinjah Celzija. Nato jeprimerno za tajanje medij počasi dodamo k celicam , dokler se ne doseže dvakratni volumen , prenesla na ločen cev in centrifugiramo . BENZONASE včasih dodamo odmrzovanje medij za preprečevanje kopičenja mrtvih T-celic . Centrifugirajo pelet se odzvali v medijih celične kulture in sposobnosti preživetja celic je ocenil . T- celice so nato pripravljeni za uporabo za posamezne poskuse.