Kako pripraviti agar plošče

agar Molekularna biologija in bakteriologije uporaba plošč za kulturo mikroorganizmov, kot so bakterije za eksperimentiranje . Agar jesredstvo, ki se strdi , ali geli ,tekoči medij hranilna z mikroorganizmi potrebna za preživetje in rast . Ko se prenese na gojišča , bakterije rastejo v različnih kolonij ( če ga gojimo pri nizkih koncentracijah ) ali brisov se lahko (če se goji v visokih koncentracijah ) in se pospravljajo za analizo. Biologi pripraviti agar plošče , sajproces zahteva dostop do Laboratorijski reagenti in strojev ter dobro razumevanje molekularne biologije in sterilnih tehnik . Tisto, kar potrebujete
Rokavice
Laboratorijskiplašč
Face maska ​​
Bunsen burner
Laminarne kapuco
sterilnih petrijevk
10g bacto - Tripton
5g kvasnega ekstrakta
15g agaroze
1 ml 1N NaOH
sterilne destilirane vode
steklenica
Avtoklav trak
avtoklavu
dodatki , na primer antibiotiki , kot so ampicilin
Prikaži več navodil
1

dal na ustrezne zaščitne opreme, vključno z rokavicami , laboratorijsko haljo in masko in dekontaminirati vse površine . Ob dela Bunsen gorilnika ali , prednostno , v sterilnem laminarni . To preprečuje nečistočam v zraku prišli v agar .
2

Odstranite kup petrijevke iz njihove embalaže , ampak razen za prepakiranje agarnem plošče . Nalepka zunanje površine posode ( nipokrovu), z vrsto agar in datumom priprave . Položiti plošče kot enega sloja s pokrovov , da bi Ležanje agar lažje.
3

Zmešajte Bacto - triptona , ekstrakt kvasa in agaroze skupaj in nato dodamo natrijev hidroksid ( NaOH) . Dodaj sterilno destilirano vodo , da dobimo 1l hranilnih medijev . To raztopino prenesemo v steklenici z najmanj prostornino 1,5 l . Ohlapno vijak na pokrovu steklenice in označiti datum priprave ter ime medijev . Postavite trak avtoklavnega traku na steklenico in jo avtoklavirajte 25 minut . Najsteklenico ohladi na ne manj kot 45 stopinj Celzija ( ali bo to strdi prehitro ) , vendar ne višja od 50 stopinj Celzija. Shranite lahko steklenici ohladi in strdi agar pri 4 stopinjah Celzija , nato pa topel do utekočinjenega . Če je to potrebno za vaš poskus ali sev bakterije , dodajte ustrezno vrsto in količino dodatka , kot so antibiotiki . Čemedij je preveč vroče, bo dopolnila treba uničiti , zato skrbno preverite temperaturo medijev , preden nadaljujete.
4

vlijte zadostno količino agar do polovice napolnite posodo , medtemagar je še vedno toplo in utekočinjeni . Prepričajte se, da jepovršina popolnoma prekrita . Ne polivajte pretiranih ali pustiteagar doseči vrh jed . Plošče hraniti v sterilnem okolju , ki ga omogočaBunsen burner ali laminaren pokrov tok za neprekinjeno delovanje . Pustimo, da se ploščice za nastavitev in nato zamenjajte pokrov .
5

sušijo agar plošče za približno 30 minut do ene ure v pečici nastavite ni višja od 37 stopinj Celzija . Druga možnost je, da jih lahko pustite v laminarni za tri minute ali na dekontaminirati laboratorijske klopi na območju z nizko gostoto prometa , ki ni prepiha , za dan ali dva . Sušenje plošče ustavi kakršno koli bakterijsko rešitev dana na hranljivem površini od zgolj z redčenjem ven in drsna off, namesto da tvorijo kolonije, ki držijo agar .
6

Previdno plošče hranite vtemi in pri 4 stopinj Celzija . Kup posušenih agar plošče z njihovimi dna do vam omogočajo, da jasno videti oznake in za preprečevanje mikroorganizme in odpadki , ki spadajo na agar površini in jih kontaminira . Postavite posodo nazaj v njihovi embalaži , pokrijte z aluminijasto folijo in trak za pakiranje zaprta. Label pakirani plošče z njihovo vsebino in datumom priprave. Lahko shranite plošče do dveh mesecev in naj jih zavrzite po tem.