TPA protokolih čiščenja

tkivni aktivator plazminogena ali TPA jevrsta serinske proteaze , ki je protein sposoben uničiti krvnih strdkov . TPA najdemo v celicah , ki pokrivajo znotraj krvne žile . TPA protokoli so del farmacevtske in medicinskih raziskavah na kapi ter bolezni srca in pljuč , kot pljučnih embolij , in miokardnega infarkta . Čiščenje TPA se nanaša na izolacijo tega proteina iz drugih molekul z vrsto postopkov , vključno s kromatografijo in elektroforezo . Čiščenje TPA iz Hog Ledvice

Ta protokol se uporablja v študijah fibrinolize ,postopek prekinitve proizvod koagulacije imenovane fibrin , povezano s tvorbo tumorjev . Tehniki izpisek iz TPA - acetona posušene prašičje ledvic s kalijevim acetatnega pufra , pH 4,2 . Nato so dodali amonijev sulfat , da induciramo obarjanje celic . Ti dodamo n - butil- Sepharose vzorcem, ki nato analiziramo na chromatographer . Concanavalinje še dejal in chromatograph.y za ločevanje različnih proteinov poteka .
Čiščenje TPA iz kitajskega hrčka in E. coli

Protein čistost pomemben faktor za uspeh bioloških eksperimentov . Očiščen TPA je na voljo na tržišču tudi s tem prihrani čas in preprečevanju tveganja , da ogrozi eksperiment zaradi slabo očiščene raztopine. Ta protokol vključuje postopke prečiščevanje TPA pri sesalcih in bakterijskih celic . Tehniki obori vzorce celic , ki jih filtrata in opravljajo afiniteto in gel za kromatografsko analizo . Kasneje so analizirati in primerjati rezultate, pred komercialno proizvodnjo.
Izraz aktivnega humani TPA v E. coli

Očiščena celični lizati so dodane lizin - Sepharose kolone , analizirani v chromatographer in izperemo z raztopino natrijevega klora . Drug vzorec nanesemo na drugo kromatografsko kolono, ki vsebuje beljakovine, ki se veže na TPA z zelo visoko afiniteto . Vzorec iz drugega stolpca zmešamo z raztopino cinkovega Sepharose . Nastali protein kaže več kot 90 -odstotno čistostjo , po reviji " uporabno in Environmental Microbiology . "