Medceličnega obarvanje protokol za pretočno citometrijo

pretočno citometrijo jeorodje, ki je uporabno za preučevanje celičnih proteinov . To izkorišča oddajanja svetlobe ali fluorescence od proteinov v celici . Protitelesa ali sonde z oznako fluorescence se uporabljajo za preučevanje posebnih proteinov . Citometrija toka, se uporabljajo za diagnosticiranje številnih bolezni , vključno z rakom , ampak je uporabna tudi v medicinskih raziskavah . Pritrdilni Celice

Celice je treba določiti , da se ohrani stabilnost znotrajceličnih beljakovin. Število utrjevalci se lahko uporablja kot formaldehidom ali ledeno mrzle acetona . Po mere , imacelična membrana , ki se permealized , daprotitelo za vstop v celico . Detergenti kot Triton ali NP -40 , lahko ali ledeno mrzla metanol se uporablja za izdelavo luknje v celične membrane.

Barvanjem

umiti celic v pufru za blokiranje 0,5 odstotka govejega serumskega albumina razredčimo v fosfatnem pufru s soljo BSA /PBS . Celice smo inkubirali v blokirnem pufru za zmanjšanje nespecifične vezave . Dodaj primarna protitelesa razredčeni v pufru za blokiranje in pustimo inkubirati pri sobni temperaturi , za optimiranje časa . Operite z pufru za blokiranje .
Analiza

Inkubiramo sekundarnega protitelesa , ki je označena s fluorescentno oznako , pri sobni temperaturi 30 minut . Da se odstranijo nevezani pranje protitelesa celic v pufru za blokiranje . Spin celice v pelete in nato resuspendirali v PBS in analizirati na pretočnim citometrom .