Kako narediti Omejitev Map

V prvih dneh molekularne biologije , znanstveniki pogosto uporablja za določitev omejitev, kartiranje razumeti gene so bili študirajo . V sodobnih raziskovalnih laboratorijih , je omejitev kartiranje večinoma zastarela , saj je zaporedje postala širše dostopna in cenejša kot v preteklosti . Vendar pa obstajajo primeri , v katerih lahkoomejitev map biti primerni za raziskovalca izpolnjevati svojih preiskav. Skupni pristop k omejevalnim kartiranje vključuje uporabo prebavnih encimov razgradil fizično vzorec DNK . Ko ste ukrep za izdelke iz te prebave , lahko " ponovno sestavite " kose in izpeljemo prvotno zaporedje DNK. Tisto, kar potrebujete
restrikcijskih encimov
vzorec DNK
Buffer Solution
ledu in toplo vodo kopel
Gel elektroforeza mehanizacija naprodaj Prikaži več navodil Neomejeno DNK prebavo

1

Dodaj restrikcijski encim na svoj vzorec DNK . Uporabite EcoR1 , a pogosto uporablja encim , npr .
2

Dodaj to mešanico v puferski raztopini , ki je v bistvuprostor za reakcijo , da se pojavljajo .
3

dvig temperature reakcije , kot je navedeno v priročniku New England Biolabs . Vsaka restrikcijska encimska ima posebno reakcijsko temperaturo, pri kateri je najbolj funkcionira . Poleg tega vsak encim ima specifično zaporedje nukleotidov je zasnovana za nadzor . EcoRI bo skeniranje in narežemo DNK na nukleotidnega zaporedja CAATTC . Ta natančen vrstni red nukleotidov, mora obstajati za encim , ki zavezuje in zmanjšanje DNK . Do te točke , bi morali biti vsi materiali, ki se hranijo na ledu , da se prepreči neželeno delovanje.
4

Potem, ko sereakcija pojavi , kot je navedeno v priročniku , prost mešanico v gel elektroforeza stroj za ločevanje DNK fragmenti glede na velikost . Najmanjši delci bo premaknil najdlje po gelu .
5

Izmerite razdalji, ki jo vsak fragment DNA . Teh pet korakov je treba ponoviti s številnimi različnimi encimi ločeno.
Gradnji omejevanju Zemljevid
6

S pomočjo podatkov , pridobljenih iz gela , zbere vseinformacije, ki ste jih najdemo uporabo različnih restrikcijskih encimov .
7

razbrati vrstni red omejitvenih mest , ki jih bodo primerjali različne dolžine fragmentov jih proizvaja vsak encim . Na primer, če encim # 1 dva fragmenta enake dolžine in encimov # 2 proizvaja tri fragmente enake dolžine , lahko sklepamo, da encim # 1 kosi na pol poti skozi DNA in encima # 2 kosi DNK v tretjini.

8

Uporaba sklepe v koraku 2 , sestavite zaporedje restrikcijskih mest za DNA.