Prilepljenih celic protokol

celic v kulturah so bodisioblika gojimo v suspenziji , kot so krvne celice ali celice, kot so fibroblasti , ki zahtevajo površine, na katero se lahko prime . Nekatere površin lahko zahtevajo za nanašanje različnih zunajcelični matric , odvisno od vrste celic in študije . Vse celične kulture zahteva, da je treba opraviti , so aseptičnih pogojih . Optimalno okolje

večina tipov celic lahko gojimo v Eaglovem mediju Dulbeccovem ( DMEM ) ali Roswell Park Memorial Institute ( RPMI ) z dodatkom 10 odstotkov fetalni telečji serum , 2 milimoles od glutamina in antibiotiki , na primer , 100 enot penicilina in 0,1 miligramov na mililiter streptomicin . Celice se ohranijo v svojih medijih v vlažnem inkubatorju pri 37 stopinjah Celzija in 5 odstotkov ogljikovega dioksida .
Cepljenje

Celice je treba preverjati vsak dan za okužbo , smrti ali rast . Kokultura bučko tkivo 80 odstotkov obložene v celicah , morajo celice razdeli za ohranitev zdravjacelice "in logaritmično fazo rasti . Mediji odstranimo in celice izperemo v fosfatnem pufru s soljo . Prilepljene celice zahtevajo dodajanje tripsina in etilendiamintetraocetne kisline (EDTA ), da odstranimo adhezijske celičnih proteinov . Nežno stresanje mora odstraniti celice . Treba Media je treba dodati , da nevtralizira raztopino tripsina /EDTA .

Subkulture

Popravljeni celice in rešitev tryspin /EDTA se lahko centrifugira na pelete in pranje celicah. Celice se lahko ponovno suspendirali v medijih in razredčena in replated novih bučk . Število celic prehod vsakič celice so razdeljene se poveča za eno.
Media Spremeni

Media je treba dvakrat na teden zamenjal z odstranitvijo stare medije in nadomesti z nova , ogreti medijev .