QuikChange Mutagenesis Protokoli

QuikChange mutagenesis jeblagovna znamka komplet, ki se uporablja v biotehnološke raziskave za indukcijo genske mutacije ali spremembe DNK . Agilent Technologies jedružba za izdelek , ki je na voljo v dveh različicah, QuikChange II in QuikChange Lightning . Oba kompleti vsebujejo blažilne raztopine encima DNA polimeraze , barvne reagente , zaporedja DNA ali primerji in vzorce celic . Mutant Strand Synthesis Reaction Protocol

Tehniki sintetizirati dve oligonukleotide ali zaporedja kratka DNK, ki vsebuje želeno mutacijo . Nato se pripravi kontrolno reakcijo s sekvencami DNA , dNTP zmesi raztopine in DNA polimeraze encima , dodali destilirano vodo . Kasneje pripravijo vrsto vzorcev reakcij z uporabo različnih koncentracij dvoverižno DNA ( dsDNA ) , medtem ko držimo primer ali koncentracijo oligonukleotidi konstantna , v skladu z navodili proizvajalca . Vodijo vzorcev na 203 stopinj F za 30 sekund . Vzorec, ki vsebuje segment DNA, številka dve je preizkušen tudi pod temperaturo kolesarjenje , tehniko, kjer temperaturne spremembe med kratkimi obdobji časov . Končno, se vzorci dajo na ledu dve minuti .

DPN I prebavo protokola o Amplification izdelki

DPN sem omejitev encim kosi DNA na specifičnih mestih . Ena mikroliterskem tega encima je neposredno doda vsakemu reakcije pomnoževanja spodaj standardni prekrivni mineralna olja, na mikro pipeto ali specializirane za aerosol odporen pipeto. Vendar pa jeprekrivna mineralno olje zahteva le, četoplotna perioda ,aparatura za pomnoževanje DNA segmente , nima hot - top sklop . Reakcija je rahlo premešamo in nato postaviti v mikro centrifugo za eno minuto . Po tem, se vzorci inkubiramo pri 98,6 stopinj F za eno uro .
Preobrazba XL1 - Blue Supercompetent celice protokol

XL1 - Blue jetetraciklin odporen celična linija , ki prihaja s kompleti QuikChange Mutagenesis . V tem protokolu , tehniki odjuge celice , ki so bile dotlej na -112 stopinj F , na ledu . Nato so dodali še eno mikro liter DPN I obdelane DNA , jo segrejte na 107,6 stopinj F za 45 sekund in postavite reakcijo na ledu za dve minuti . Po tem postopku tehniki dodamo pripravo NZY ( hidrolizata kazeina in ekstrakt kvasa ) , segrete na 107,6 stopinj F in inkubiramo eno uro . Pripravek se nato dal na agar gel plošče in inkubiramo pri 98,6 stopinj F za 16 ur .