Ali lahko uporabite serum za western blot?

Čeprav je mogoče uporabiti serum za izvedbo Western blota, to na splošno ni priporočljivo. Serum je kompleksna mešanica, ki vsebuje celice in beljakovine, vključno s tistimi, ki lahko motijo ​​odkrivanje specifičnih beljakovin, ki nas zanimajo. Poleg tega ima lahko serum visok signal v ozadju, kar lahko oteži odkrivanje beljakovin z nizko vsebnostjo. Zaradi teh razlogov se prečiščeni vzorci beljakovin običajno uporabljajo v Western blotih.

Vendar pa je v nekaterih primerih morda potrebna ali koristna uporaba seruma za Western blot. Na primer, če je beljakovina, ki nas zanima, v prečiščenem vzorcu beljakovin prisotna v majhni količini, lahko uporaba seruma poveča možnost odkrivanja beljakovine. Poleg tega se serum lahko uporablja za preučevanje interakcij med beljakovinami ali za odkrivanje protiteles proti specifičnim beljakovinam.

Če je treba za Western blot uporabiti serum, je pomembno sprejeti ukrepe za zmanjšanje možnosti motenj in signala v ozadju. Ti koraki lahko vključujejo:

* Priprava vzorca seruma s centrifugiranjem za odstranitev celičnih ostankov in netopnih delcev.

* Redčenje vzorca seruma za zmanjšanje koncentracije motečih snovi.

* Uporaba blokirnega sredstva, kot je goveji serumski albumin (BSA), za zmanjšanje nespecifičnih interakcij.

* Optimizacija pogojev Western blottinga, kot so koncentracije protiteles in inkubacijski časi, za zmanjšanje signala v ozadju.

Na splošno uporaba seruma za Western blot na splošno ni priporočljiva zaradi možnosti motenj in signala v ozadju, vendar je v nekaterih primerih morda potrebna ali koristna. Pri uporabi seruma je nujna skrbna optimizacija pogojev Western blottinga.