Kako meriti catalase Koncentracije

Catalase jebiološko ( organsko ) katalizator . Ta encim je eden od najmočnejših znane katalizatorje in ima ugodne učinke na človeško telo in je ključnega pomena za življenje . Catalase deluje kot katalizator pri pospeševanju razgradnjo vodikovega peroksida . Vodikov peroksid je presnovni stranski produkt , ki je strupena za celice , če ne odstrani . Katalaza, pomaga pri razgradnji vodikovega peroksida v vodo in kisik . Katalaza tudi pomaga pri oksidacija druge toksine , kot so fenoli , mravljično kislino, formaldehid in alkoholov . Tisto, kar potrebujete
Dva 110 ml kromogena v fosfatnem
300 ! Li podlago - 30 % vodikovega peroksida
400 μL.HRP - hrenovo peroksidazo v fosfatnem pufru
60 ml fosfata varovalni
250 ml vzorec razredčila, površinsko aktivne snovi v fosfatnem pufru
dve 30- ml Substrat razredčilo fosfatni pufer
Dva 30 ml stop reagenta - Natrijev azid
dve viali 160 ie /viala standardni catalase
Spektrofotometer
10 ml nastavljivi pipete
1 cm dolžine poti spektrofotometrični kivete
1,5 ml polipropilenske mikrocevk s pokrovčkom
epruvete - 12x75 milimetra ( 2,5 ml vsake )
Timer
deionizirana voda

Prikaži več navodil

1

pripravite zalogo katalaze , ki vas bo merjenje z dodajanjem 200 mikrolitrov ( ul) deionizirane vode v koncentracijah katalaze v 50 mililiter (ml) vial . Stopnja koncentracije catalese mora biti 160 enot na mililiter ( U /ml) .
2

med 30 ml razredčenega katalaze v cevi . Dodamo 500 ul substrata ( vodikov peroksid - 10mm H2O2 ) v vsako epruveto . Bodite previdni, da ne škropite vodikov peroksid pri delu z njim .
3

Inkubiramo vsako posamezno cev za eno minuto pri sobni temperaturi .
4

Dodamo 500 &ME; L reagenta na vsaki viali . Cap vsako vialo in premešamo z obračanjem viale gor in dol . Ne vrtite mešanico pretresite stekleničko ali pa ga mešamo s predmetom .
5

Dodajte 20 ul vsake reakcijske zmesi v epruvete . Dodamo 2 ml na HRP reagenta v vsako epruveto . Again, zmešajte raztopino z obračanjem epruvete večkrat .
6

ponovno inkubiramo rešitev , tokrat za 10 minut pri sobni temperaturi.
7

Preberite absorpcijo nivo raztopine s spektrofotometrom . Ukrepi spektrofotometer svetlobo valovne dolžine, natančno določiti, katere snovi so prisotne in in kaj koncentracije . Ta metoda bo natančno branje koncentracij katalaze . Podatki so uporabne v okviru interakcije katalaze z vodikovim peroksidom , kot je v tem eksperimentu , in tako poteka v človeškem telesu .